lncRNA與microRNA的靶點驗證

 

lncRNA的作用機制有很多，以ceRNA（competing endogenous RNA，競爭性的內(nèi)源RNA）形式發(fā)揮功能是其中的一種，即lncRNA與靶基因的3’UTR競爭結(jié)合相同的microRNA，降低microRNA對靶基因的抑制功能，從而上調(diào)靶基因的表達量。為了檢測其效果，我們可以用Western Blot檢測靶蛋白的表達水平，也可以用qRT-PCR檢測靶基因的表達。但是這兩種方式都無法確定lncRNA是否通過ceRNA方式調(diào)控靶基因的表達。因此，我們可以通過“microRNA與lncRNA結(jié)合驗證”，“microRNA與靶基因結(jié)合驗證”和“lncRNA與靶基因3’UTR競爭結(jié)合microRNA驗證”實驗，構(gòu)建Sensor reporter并進行活性檢測，對lncRNA，microRNA與靶基因這三者間的作用機制作出準(zhǔn)確判斷。

 

 

服務(wù)優(yōu)勢：

 

（1）利用專業(yè)軟件進行miRNA與lncRNA和靶基因3’UTR區(qū)的結(jié)合位點預(yù)測；

（2）采用Promega公司特有psiCHECK質(zhì)粒；

（3）所采用的Luciferase雙熒光報告系統(tǒng)，可以獲得寬泛的線性定量范圍與極高的靈敏度；

（4）采用瞬時轉(zhuǎn)染技術(shù)，操作簡便、快速，周期短，適用于絕大多數(shù)細胞類型。

 

 

服務(wù)流程：

 

一、microRNA與lncRNA結(jié)合驗證

（1）直接合成靶lncRNA序列或microRNA在靶lncRNA上的結(jié)合位點序列；

（2）將上述合成的DNA片段克隆至報告基因載體psiCHECK質(zhì)粒；

（3）購買microRNA mimics；

（4）將報告載體與microRNA mimics共轉(zhuǎn)染293T細胞；

（5）多功能酶標(biāo)儀檢測報告基因的表達水平；

（6）數(shù)據(jù)分析，整理提交客戶原始數(shù)據(jù)及項目報告；

 注：為了實驗的嚴謹性，可加入靶lncRNA序列中microRNA預(yù)測結(jié)合區(qū)域的突變體作為對照，進一步說明問題。

 

二、microRNA與靶基因結(jié)合驗證

（1）直接合成靶基因3’UTR序列或microRNA在靶基因3’UTR上的結(jié)合位點序列；

（2）將上述合成的DNA片段克隆至報告基因載體psiCHECK質(zhì)粒；

（3）購買microRNA mimics；

（4）將報告載體與microRNA mimics共轉(zhuǎn)染293T細胞；

（5）多功能酶標(biāo)儀檢測報告基因的表達水平；

（6）數(shù)據(jù)分析，整理提交客戶原始數(shù)據(jù)及項目報告；

 注：為了實驗的嚴謹性，可加入靶基因3’UTR區(qū)microRNA預(yù)測結(jié)合區(qū)域的突變體作為對照，進一步說明問題。

 

三、lncRNA與靶基因3’UTR競爭結(jié)合microRNA驗證

（1）直接合成靶基因3’UTR序列或microRNA在靶基因3’UTR上的結(jié)合位點序列；

（2）將上述合成的DNA片段克隆至報告基因載體psiCHECK質(zhì)粒；

（3）直接合成lncRNA序列，構(gòu)建lncRNA過表達質(zhì)粒；

（4）將報告載體與lncRNA表達載體共轉(zhuǎn)染293T細胞；

（5）多功能酶標(biāo)儀檢測報告基因的表達水平；

（6）數(shù)據(jù)分析，整理提交客戶原始數(shù)據(jù)及項目報告；

 注：為了實驗的嚴謹性，可加入靶基因3’UTR區(qū)microRNA預(yù)測結(jié)合區(qū)域的突變型報告載體及lncRNA序列中microRNA預(yù)測結(jié)合區(qū)域的突變型表達載體作為對照，進一步說明問題。

單位介紹

• 漢恒生物科技（上海）有限公司是國內(nèi)首家專業(yè)從事腺相關(guān)病毒（AAV）載體研究和開發(fā)的公司，成立于2010年。擁有一支由博士和碩士為主50多人的優(yōu)秀研發(fā)團隊，擁有全面的AAV血清型體系，完善的AAV光遺傳原件庫，快速表達的scAAV體系和AAV衍生的在體應(yīng)用工具，開發(fā)了自噬流研究工具、分子載體探針、Crispr基因編輯等基因及信號通路研究工具，積累了上千個病毒項目經(jīng)驗，是國內(nèi)唯一一家擁有AAV-saCas9在體編輯工具和AAV-LC3在體自噬流檢測工具的公司。公司建立了ISO9001質(zhì)量管理體系，擁有發(fā)明專利1項，申請發(fā)明專利5項。

單位資質(zhì)

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